2.×μm UHPLC色譜柱
要完全實現(xiàn)UHPLC色譜柱的更高柱效，就必須讓液相系統(tǒng)的擴散效應對色譜柱的影響盡可能小。小顆粒色譜柱，會讓色譜峰更窄更尖銳，提高分離度；但是，更窄的色譜峰，對柱外擴散體積更為敏感。因此，根據(jù)系統(tǒng)的擴散體積，匹配合適的色譜柱規(guī)格，對于實現(xiàn)分離性能至關重要。
如何選擇合適的亞三微米色譜柱？
根據(jù)如下四步驟加以考慮：
色譜填料/鍵合相的選擇性與耐受性：滿足目標應用的需要；
色譜柱長與粒徑的比值L/dp：色譜柱的柱效水平是否滿足目標應用的分離度需求；
柱長L與粒徑dp對柱壓的影響：考慮色譜柱運行柱壓，是否能兼容您的液相系統(tǒng)；
色譜柱內徑：對于擴散體積較大的系統(tǒng)，選擇4.6 mm內徑，可以減少系統(tǒng)對柱效的影響程度。
色譜柱規(guī)格選擇指導
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系統(tǒng)
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HPLC
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UHPLC
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UPLC
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擴散體積測量值
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>40μL
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22-29μL
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<20μL
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常規(guī)操作壓力
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<4000 psi
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<10,000 psi
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<18,000 psi
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色譜柱粒徑
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3-5μm
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2-3μm
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<2μm
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色譜柱內徑
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4.6 mm (3.0 mm)
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3.0mm (2.1mm)
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2.1mm (1.0 mm)
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色譜柱長度
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75-250mm
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50-100mm
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≤150mm
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以上根據(jù)Waters LC系統(tǒng)來推薦色譜柱規(guī)格。
對任何LC系統(tǒng)都適用的柱規(guī)格
在轉移LC方法時，儀器譜帶展寬是需要確定的十分關鍵的LC儀器參數(shù)之一。了解譜帶展寬，能幫助色譜分離化學家所開發(fā)的方法，兼容任何一臺LC系統(tǒng)。如下色譜柱規(guī)格表，基于儀器譜帶展寬名義測量值。
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系統(tǒng)
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LC技術
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譜帶展寬*
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推薦色譜柱的粒徑與內徑
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Shimadzu Prominence UFLC
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HPLC
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41μL
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XBridge 3.5, 5μm; XSelect 3.5, 5 μm;
CORTECS 2.7 μm
3.0–4.6 mm I.D.
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Alliance 2695 HPLC
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HPLC
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29 μL
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Agilent 1260 UHPLC (600 bar)
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HPLC
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28 pL
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Thermo Accela UHPLC
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HPLC
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21μL
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XBridge 2.5, 3.5, 5 μm; XSelect 2.5, 3.5, 5 μm;
CORTECS 2.7 μm 3.0 mm I.D.
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Agilent 1290 UHPLC (1200 bar)
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UHPLC
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17 μL
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ACQUITY Arc
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UHPLC
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23 μL
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XBridge 2.5, 3.5, 5 μm; XSelect 2.5, 3.5, 5 μm;
ACQUITY UPLC HSS 1.8 μm,
CORTECS 2.7 μm
3.0 mm I.D.
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ACQUITYUPLC
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UHPLC
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12 μL
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ACQUITY UPLC BEH 1.7 μm;
ACQUITY UPLC CSH 1.7 μm;
ACQUITY UPLC HSS 1.8 μm,
CORTECS 1.6 μm
2.1 mm I.D.
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ACQUITY UPLC H-Class W/Column Manager
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UPLC
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12 μL
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ACQUITY UPLC H-Class
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UPLC
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9μL
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*這些測量數(shù)值基于未經調整的儀器，僅作為參考。對于系統(tǒng)的泵、管路連接、以及儀器參數(shù)的任何調整，都會改變該儀器的譜帶展寬。
