苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的測定 HPLC法
苯甲酸、山梨酸和糖精鈉是常用飲料及食品等的添加劑。食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定方法有氣相色譜法(GC)、薄層色譜法(TLC)和高效液相色譜法(HPLC)。GC 法準(zhǔn)確度不夠，分離度不好；TLC 法操作復(fù)雜，僅可半定量分析； HPLC 法可同時測定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉。具有方法簡便，靈敏度高，選擇性好，線性范圍寬等優(yōu)點。
(1) 材料與樣品處理
儀器 ：高效液相色譜儀(配紫外檢測器)。
試劑：1. 甲醇(CH3OH)色譜純；
2. 乙酸銨(NH4Ac) A.R.；
3. 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.0mg/mL)；
4. 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.0mg/mL)；
5. 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.0mg/mL)；
6. 純水。
(2) 色譜條件
色譜柱：Venusil® XBP C18 L 4.6mm×250mm 5μm；
波 長：230nm；
流動相：0.02mol/L 乙酸銨：甲醇=(95+5)；
流 速：1.0mL/min；
進(jìn)樣量：20μL；
柱 溫：30℃。
在上述色譜條件下，注入20μL 苯甲酸、山梨酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)混合液(0.04、0.02、0.04μg/μL)。色譜圖見圖1
(3) 結(jié)果與討論
3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)混合液的配制。吸取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制濃度分別為0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10μg/μL 的標(biāo)準(zhǔn)混和液。按上述色譜條件測定峰面積，并繪制校正曲線。見圖2～4。由圖可見，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉校正曲線的線性關(guān)系良好(相關(guān)系數(shù)均大于0.99900)。
3.2 苯甲酸、山梨酸和糖精鈉測定精密度試驗
在上述色譜條件下，連續(xù)六次吸取苯甲酸、山梨酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)混和液(濃度分別為0.02、0.04、0.04μg/μL)20μL注入色譜儀，分別繪制色譜圖。見圖5。
a) 保留時間測定精密度試驗, 見表1。
b) 峰面積測定精密度試驗，見表2。
由表1～2 可見，苯甲酸、山梨酸和糖精鈉保留時間相對標(biāo)
(4) 訂貨指南
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格包裝
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訂貨號
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Venusil® XBP C18(L)液
相色譜柱
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內(nèi)徑4.6×長度250mm,粒徑 5μm, 100?
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VX952505-L
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針式過濾器(Nylon)
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孔徑0.45μm, 直徑13mm, 100/pk
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一次性無針頭注射器
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5mL, 100/pk
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1.5mL樣品瓶（含蓋墊）
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透明，開孔瓶蓋，紅色 PTFE/白色硅膠，直徑9 mm ,厚度1mm，100/pk
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V0102100-2
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甲醇
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4×4L/箱
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AH230-4
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乙腈
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4×4L/箱
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AH015-4
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準(zhǔn)偏差(RSD)范圍為0.39～0.74%；峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)范圍為0.66～0.88%。表明儀器系統(tǒng)測定精密度良好。
3.3 內(nèi)控樣品測定
用可口可樂飲料作基質(zhì)，配制含苯甲酸、山梨酸和糖精鈉濃度分別為0.04、0.02、0.04μg/μL 的內(nèi)控樣品。按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行樣品預(yù)處理。在同樣條件下測定苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量。結(jié)果分別為0.0400、0.0198、0.0396μg/μL。
3.4 結(jié)論
高效液相色譜儀及色譜柱 Venusil XBP C18L(4.6mm×250mm，5μm)，測定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉，具有靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、精密度和線性關(guān)系良好、出峰時間快、峰形好、分離度好等特點。適用于飲料、食品等中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量的測定。
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